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                制備單克隆抗體時有哪些具體步驟

                點擊次數:314  更新時間:2023-12-19
                一抗可用于檢測糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標志物。二抗則主要用于檢測和純化抗原蛋白。二抗在標記和檢測方面比較靈敏和靈活。所以,它們在流式細胞術、蛋白質印跡和細胞成像等一系列應用中用于一抗的比色、化學發光和熒光檢測。二抗類型的選擇基于一抗的類別:免疫球蛋白IgG或IgM、標簽類型和來源宿主。
                制備單克隆抗體時有哪些具體步驟:
                一、免疫動物選擇
                根據需要產生目標抗原的免疫反應,選擇合適的免疫動物。例如,小鼠是免疫動物之一,因其易于操作且在免疫應答方面較為強大。
                二、抗原免疫
                將目標抗原注射到免疫動物體內,通常需要多次免疫以激發免疫反應??梢赃x擇不同的免疫路線,如皮下、腹腔、靜脈等。
                三、細胞融合
                從免疫動物獲得脾細胞或淋巴細胞,與骨髓瘤細胞或其他癌細胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成雜交瘤細胞。融合細胞通常使用(PEG)或電穿孔等方法促進細胞融合。
                四、雜交瘤細胞篩選
                對融合細胞進行篩選,一般使用HAT選擇性培養基,通過對非雜交瘤細胞和單克隆雜交瘤細胞的抗代選擇,篩選出產生目標抗體的單克隆雜交瘤細胞。
                五、單克隆抗體生產
                從篩選出的單克隆雜交瘤細胞中獲取單一細胞系,并進行大規模培養和產生抗體。一般可采用體外或體內方式。
                 
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