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                首頁   >    技術文章   >   小鼠小腸結腸炎耶爾森菌試劑盒

                小鼠小腸結腸炎耶爾森菌試劑盒

                點擊次數:711  更新時間:2015-12-14

                耶爾森菌實驗原理:

                    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中小鼠小腸結腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)。用純化的小鼠小腸結腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中小腸結腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的小腸結腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中小鼠小腸結腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)的存在與否。

                樣本處理及要求:

                1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

                2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

                3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

                4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。抗體

                5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

                6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

                7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

                耶爾森菌操作步驟:

                1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

                2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

                3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

                4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

                5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

                7.溫育:操作同3。

                8.洗滌:操作同5。

                9.顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘

                10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。抗體

                11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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